细菌是广泛存在的单细胞微生物。它们的直径通常只有几微米,形状各异,从球状、棒状到螺旋状。细菌是细胞培养中最常见的生物污染物。尽管可以用光学显微镜进行检测,在污染的早期阶段,细菌很容易被误认为是细胞碎片。
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“污染嫌疑者”
常见的污染源?
实验室操作人员
葡萄球菌的主要源头。
脏水浴、恒温箱、玻璃器皿……
假单胞菌和黄杆菌的主要源头。
从动物组织分离出的细胞
共生菌群和/或无症状感染的源头。
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如何检测细菌污染?
在污染的早期阶段,因为细菌比真核细胞(10-100μm)小得多(1-10μm),它们可能被误认为是细胞碎片。因此,在显微镜下使用相位对比(100x-400x)检查细胞培养是很重要的。您有没有看到小黑点、棒状物、螺旋状物?它们可以是单独存在,成链存在,或者成簇存在。它们是能活动的吗?如果答案是肯定的,您的细胞培养可能受到了污染。
由于细菌生长速度快,它们能在48小时内引起培养基的变化,细菌污染从105cfu/ml起变得肉眼可见,培养基呈浑浊状态。细菌代谢导致培养基pH值下降,如果含有酚红,培养基会从红色变到黄色表示pH值下降。最终,培养环境不再适合真核细胞导致其死亡。这些受污染的培养物应该被废弃,但如果它们是不可替代的话,
可使用InvivoGen的复合抗生素处理(见细菌污染的清除跟预防一文)。
1. Ryan J. 2008., 2. Lincoln C. & Gabridge M. 1998., 3. Fogh J. 1973., 4. McGarrity
GJ. & Coriell LL. 1971., 5. Gray JS. et al. 2010., 6 McGowan JE Jr., 2006.
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