内毒素，又称脂多糖（LPS），是革兰氏阴性细菌的主要细胞壁成份。内毒素的来源包括培养基、血清、水、缓冲溶液和其他细胞培养试剂，如胰蛋白酶。内毒素是体内外炎症反应的有效诱导剂。内毒素污染是细胞培养和生产注射药物中的主要问题。溶液和试剂可能是无菌但仍含有细菌成分，因此监测细胞培养试剂中是否存在内毒素至关重要。
内毒素的特点：
• 3 - 40 kDa：取决于O抗原的大小
• 两亲性：>1000 kDa 会在水溶液中形成聚集物
• 抗紫外线和热稳定性 （最高180°C）
• 多糖：大小因细菌种类而异。在人体诱导特异性抗原反应。
• 脂质A：具有LPS毒性。刺激哺乳动物免疫系统。
内毒素的污染源：
1.水
使用高纯度水制备培养基和溶液，清洁玻璃器皿。
2.玻璃器皿
为了消除内毒素，必须将玻璃器皿加热至250°C（≥30分钟），或加热到180°C（3 小时）。
3.培养液、血清和添加剂
使用前要求制造商提供内毒素水平认证或测试。
4.塑料容器
要求制造商提供内毒素水平和无致热源的证明。
体外和体内实验的风险
内毒素在体外和体内实验均可引起不稳定性。脂质A能够激活细胞表面或内体的Toll样受体4（TLR4），诱导MAP激酶（MAPK）及IRF（干扰素调节因子）通路的激活20, 21。尽管内毒素的作用随浓度和细胞类型的不同而改变，但它们确实可以改变细胞形态、影响增殖和转染效率22。此外，LPS还诱导了炎性细胞因子如TNF-α 、IL-1β 、IL-6 、IL-8 和 IL-18的产生，并激活 caspase 4/5/11-NLRP3 非经典炎症小体，最后导致细胞焦亡20, 23。在体内实验，低内毒素浓度可刺激免疫系统，而高浓度可引起发烧、低血压、多器官衰竭，甚至死亡22。
使用生物试剂检测内毒素
细胞比色分析法
HEK-Blue™ LPS Detection Kit 2
• 用途广泛：适用于几乎所有的生物试剂
• 高灵敏度：检测限为 0.01 EU/ml
• 经济实惠：1个试剂盒最多可进行500次测试
试剂盒依赖于InvivoGen专有的HEK-Blue™-4细胞，该细胞稳定表达人源TLR4和一个NF-κB诱导的分泌型胚胎碱性磷酸酶（SEAP）报告基因。简单的实验程序使该试剂盒成为常规测试的理想选择。只要样品中含有微量的LPS，在与HEK-Blue™-4细胞孵育过夜后，会导致NF-κB的激活和SEAP报告基因的表达。培养上清液中的SEAP活性通过加上底物QUANTI-Blue™溶液，并使用分光光度计在620-655nm的波长测量。吸光度与内毒素含量成正比。使用试剂盒中提供的HEK-Blue™内毒素标准品，经系列稀释获得标准曲线从而计算内毒素浓度（大肠杆菌055:B5 LPS 的制备参照FDA批准的内毒素工作标准品（CSE）制备标准）。HEK-Blue™ LPS检测试剂盒2也是InvivoGen内部的常规内毒素检测方法。
LPS检测试剂盒2的原理（见下图）
使用此试剂盒的5大原因
1.替代昂贵而耗时的鲎试剂（LAL）。购买此套件一次，冻存HEK-Blue™-4细胞，以后只需重新订购其他耗材。
2.与LAL分析不同，如果样品含有（1,3）-β-D-葡聚糖，使用HEK-Blue™-4细胞进行LPS检测不会导致假阳性。
3.适用于所有生物样品，包括培养基、血清、化学制剂和疫苗佐剂。
4.溶液颜色从粉红色变为紫/蓝色表示阳性反应，结果简单可视。
5.包括一本实验程序小册子，计算内毒素浓度的方法，以及疑难排解部分
相关文献：
— Gray M. A. et al., 2020. Nat Chem Biol. Targeted glycan degradation potentiates the anticancer immune response in vivo. DOI: 10.1038/s41589-020-0622-x.
— Imbert P. R. C. et al., 2021. Curr Biol. An Acquired and Endogenous
Glycocalyx Forms a Bidirectional “Don’t Eat” and “Don’t Eat Me” Barrier to Phagocytosis. DOI: 10.1016/j.cub.2020.09.082.
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产品名称
| 产品说明 | 规格 | 货号 |
| HEK-Blue™ LPS Detection Kit 2 | Assay for the detection and quantification of biologically active LPS | 1 kit | rep-lps2 |
| HEK-Blue™ Selection | Antibiotics for maintenance of HEK-Blue™ cells | 10 x 1 ml | hb-sel |
| HEK-Blue™ Endotoxin Standard | Standardized E. coli 055:B5 LPS | 10 x 50 EU | rep-hbes-10 |
| QUANTI-Blue™ Solution | Alkaline phophatase detection medium (liquid form, 100X) | 5 ml 10 ml | rep-qbs rep-qbs2 |
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