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peprotech ELISA常见问题及解答

2022-02-15
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本篇给各位需要做科研实验的朋友们准备了在使用peprotech生产的ELISA产品时,会遇到的一些常见问题,及解答,希望能够帮助到各位做科研的朋友们。


1. PeproTech ELISA试剂盒中所含的HRP(辣根过氧化物酶)偶联物试剂的稳定性如何?

ABTS ELISA试剂盒中的Avidin-HRP在2-8˚C最多保存一个月,在-20˚C最长可保存2年,此时建议分装冻存,以避免反复冻融。TMB ELISA试剂盒中的Streptavidin-HRP在2-8˚C中可保存半年以上。


2. 我如何知道某个试剂盒的交叉反应信息?

PeproTech在实验室内自行测试了其ELISA试剂盒的交叉反应性,您可在试剂盒的说明书中查看测试结果。


3. ELISA实验过程中如果想周末停一下怎么办?

可以在星期五用包被抗体将板包好,然后放在4˚C保存,下周一再继续实验。请注意:抗体包被时间的改变可能会引起板间结果的差异。


4. PeproTech的EDK是否适用于所有类型的标本?

虽然PeproTech没有用其试剂盒对每种标本进行测试,但这些试剂盒应该适用于(但不仅限于)以下标本:血清、血浆、细胞培养上清液、尿液和唾液。


5. 显色反应需要终止吗?

Avidin-HRP和底物ABTS的显色反应是不需要终止的。当标准品的零孔OD值小于0.2,或最高浓度孔OD值小于1.2时,通常可以获得可靠的标准曲线。如要终止显色反应,可以用1% SDS (十二烷基磺酸钠)作为终止液。虽然资料显示SDS是ABTS的最适终止液,但PeproTech并未在实验室中使用终止液。


对于PeproTech所有的TMB试剂盒,推荐使用终止液(1M HCl)。


6. 对于TMB EDK试剂盒,除620nm的校正波长以外, 还可用哪些波长进行校正?

TMB试剂盒可以用540,570,620或650nm等校正波长。


7. PeproTech的ABTS EDK可以用TMB作为底物吗?

PeproTech的ABTS EDK是用ABTS进行优化的,因此最好使用ABTS作为底物。这些试剂盒也可与TMB配合使用,但需要做一些调整:

•试剂盒中的Avidin-HRP不能与TMB配伍,必须另购链霉亲合素-HRP。

•链霉亲合素-HRP的工作浓度需要优化。

•使用链霉亲合素-HRP和TMB时,通常需用终止液,请按照TMB的厂家说明书操作。

•加终止液前,TMB的反应时间需要优化。

•请使用推荐的酶标板,并在450nm读取吸光值,校正波长为650nm。


8. EDK的组分中为什么要添加D-甘露醇?

在EDK的组分中加入D-甘露醇的目的是使蛋白/抗体可见,这不会影响ELISA的检测结果。


9. 是否可以将EDK说明书中的曲线作为我的标准曲线?

每块ELISA板必须单独做标准曲线,也就是说,一块板的标准曲线不能用于另一块板。PeproTech的EDK说明书中提供的标准曲线是在自己的实验室中做出来的,仅可用作示例。 


10. PeproTech的标准曲线是怎样生成的?

PeproTech在实验室中用Molecular Devices®公司的酶标仪读板,然后用SOFTmax® PRO软件进行结果分析,该软件能将获取的数据进行四参数曲线拟合,公式如下:

四参数曲线拟合(4-P Fit):

 peprotech ELISA常见问题及解答

x:浓度(pg/ml)

y:OD值(450nm – 650nm)

A, B, C, D对应于标准曲线的四个参数*。

*想了解参数的详细信息,请与我们的质量保证(QA)部门联系。 


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