细胞培养于悬滴(hanging drop), 自组装形成球状细胞簇。 Cayman采用3D Biomatrix公司的3D细胞培养平台，开发出了两款全新的试剂盒用于研究Perfecta3D®培养板上的球状体(spheroid)细胞。即Perfecta3D®细胞活力检测试剂盒及Perfecta3D®细胞毒性检测试剂盒，可快速精准的检测球状体的一些基本细胞过程。
研究复杂的细胞和组织，及其信号传导与调控可不是件容易事。而模拟细胞或组织环境，建立最接近体内天然条件的实验系统同样困难。这就是3D细胞培养所面临的挑战，3D培养系统旨在更好的模拟细胞的体内生长环境。近来越来越多的证据表明，3D细胞培养系统比传统2D培养系统更贴近体内的生理条件。美国3DBiomatrix公司生产的Perfecta3D®悬滴板是一个新的三维细胞培养平台，能够在多孔板模式中形成大小均匀的球状体悬滴；这种悬滴是细胞自组装形成的球状细胞簇，是三维（3D）细胞培养和筛选中研究的最有利的模型之一。同其他类型的3D支架和水凝胶等方法相比，这种球状体具有简单性，可重复性以及生理组织的相似性，能模拟组织肿瘤固有的代谢（氧气、二氧化碳、养分、废物）和增殖梯度变化。作为优良的生理肿瘤模型可以提供比2D细胞培养更可靠的结果。 
图1. Perfecta3D®悬滴培养板促进细胞球体在悬滴中的培养。用移液器将细胞悬液加入每个孔，细胞自组装形成的球状细胞簇。
应用一. 细胞活性检测
在细胞研究中，对细胞活性及细胞毒理的检测是一项基本的细胞学技术，通常采用WST-1法。WST-1是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的可溶性formazan盐。Formazan产物的吸光度与活细胞的数量及活性成正比。
Cayman开发的Perfecta3D®细胞活力检测试剂盒（产品编号：600990）, 提供3D细胞培养板、WST-1试剂、电子媒介体溶液（Electron Mediator Solution）以及分析用的圆底板。如图2所示，HEK293细胞以不同细胞密度培养于悬滴中，设置Vehicle对照以及逐渐增加Triton X-100浓度的实验组（处理1小时）。然后转移细胞至圆底板，与WST-1溶液孵育，最后在450nm读数。OD值随细胞数升高，随Triton X-100浓度的升高而降低。 
图2. 起始细胞数量对450nm吸光度的影响。HEK293细胞以不同起始细胞密度加入3D培养板，将培养板移入37度CO2孵育箱中。4天后，细胞经Vehicle, 0.001%或0.01% Triton X-100处理1小时，然后转移至圆底板，每孔加入WST-1试剂。细胞于37度孵育3.5小时后，于450nm测定吸光度。
应用二. 细胞毒性检测
细胞膜完整性的丧失是细胞毒性的表现形式之一，导致细胞的渗漏。LDH是一个可溶性的胞浆酶，可从受损细胞释放到培养基中，因此被用作细胞溶解、细胞毒性以及细胞活性等的标志分子。Cayman开发的Perfecta3D®细胞毒性检测试剂盒（产品编号：601050）提供3D细胞培养板以及检测LDH的必需试剂。细胞培养于悬滴中，通常含40-50ul的培养基，如要处理细胞，可移出10ul培养基，加入含有测试化合物的替换培养基。进行细胞毒性检测时，可移出10ul培养基，然后将细胞转移至标准的96孔板，用LDH试剂进行检测。490nm读数，吸光度与LDH浓度线性相关（图3）。
图3. LDH标准曲线。LDH标准品溶于不含FBS的RPMI 1640中，然后每孔加入100ul的反应液，室温孵育30分钟。