Cayman的DNA/RNA损伤检测试剂盒
当DNA和RNA受损时最容易氧化的区域是鸟嘌呤上的C-8位置。在修复DNA或RNA损伤的过程中，几种氧化鸟嘌呤（图1）被释放到尿液中。其中8-羟基-2'-脱氧鸟苷一直被认为是DNA氧化损伤的生物标志物；近年来，人们对于RNA损伤及其标志物的研究和评估越来越深入。据报道，8-羟基鸟苷是与年龄相关的氧化损伤的最具代表的标志物1,2。相较于仅限分析一种氧化鸟嘌呤（如8-羟基-2'-脱氧鸟苷）的检测方法，检测多种氧化鸟嘌呤的方法可以捕获更完整的氧化损伤生物相关产物3。
图1、氧化鸟嘌呤的种类
Cayman可提供2种不同用于检测DNA损伤标志物的ELISA试剂盒。
2种试剂盒比较如下：
产品名称 | 检测 | 样本类型 | 灵敏度 |
8-羟基-2'-脱氧鸟苷 8-羟基鸟苷 | 尿液（其他样本类型尚未验证，但可以使用） | 检测范围=0.15-20ng/ml 80%B/B0=0.45ng/ml 50%B/B0=1.25-1.75ng/ml | |
8-羟基-2'-脱氧鸟苷 8-羟基鸟苷 8-羟基鸟嘌呤 | 尿液、细胞培养基、细胞裂解液、 组织样本、唾液、血浆/血清 | 检测范围=0.0103-3ng/ml 80%B/B0=0.03ng/ml 50%B/B0=0.9-0.14ng/ml |
1、检测抗体
每个试剂盒都基于单克隆检测抗体的不同克隆，该克隆与其他密切相关的鸟嘌呤发生交叉反应。因此，每个试剂盒都能区分一组不同的氧化鸟嘌呤。
8-hydroxy-2’-deoxyguanosine……..100% cross reactivity | 8-hydroxy-2’-deoxyguanosine……..100% cross reactivity |
8-hydroxyguanosine…………….….100% cross reactivity | 8-hydroxyguanosine………………..38% cross reactivity |
8-hydroxyguanine…….…………….0.15% cross reactivity | 8-hydroxyguanine…………………..23% cross reactivity |
2、样本类型验证：以下样品已经过cayman验证。
尿液（其他样本类型尚未验证，但可以使用） | 尿液、细胞培养基、细胞裂解液、组织样本、唾液、血浆/血清 |
3、灵敏度
虽然DNA/RNA氧化损伤（高灵敏度）ELISA试剂盒在两种试剂盒之间表现出更高的灵敏度，但克隆7E6.9 ELISA的灵敏度完全在人类尿液中氧化鸟嘌呤的可检测范围内。
4、LC/MS相关性：cayman将这两种试剂盒在人类尿液中的ELISA数据与相同生物样本的LC/MS数据进行了比较。LC/MS方法的数据表明，在1 ng/ml时，相对标准偏差为3.74%，定量限为100 pg/ml，检测限为30 pg/ml。
基于克隆7E6.9的ELISA表明，与单独使用8-羟基-2'-脱氧鸟苷相比，8-羟基-2'脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷组合的LC/MS测量结果与8-羟基-2'-脱氧鸟苷的LC/MS测量结果密切相关。
DNA/RNA氧化损伤（高灵敏度）ELISA试剂盒也与LC/MS值相关，但具有高斜率。目前尚不清楚除了测量8-羟基-2'-脱氧鸟苷外，该试剂盒还测量了哪些其他代谢物。
更多详情见：Critical comparison of three 8-hydroxy 2’-deoxyguanosine monoclonal antibodies
5、两种试剂盒都使用基于平板的比色法测量（405-420nm），protocol类似，详见官网。
参考文献：
1. Gan, W., Nie, B., Shi, F., et al.] Free Radic. Biol. Med.52, 1700-1707 (2012).
2. Shi, F., Nie, B., Gan, W., et al. Free Radic. Res. 46(9), 1093-1098 (2012).
3. Weimann, A., Broedbaek, K., Henriksen, T., et al. Free Radic. Res.46(4), 531-540 (2012).
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